细胞核提取试剂盒样本处理

    细胞核提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的细胞核。适合于动物软组织(肝或脑组织)和硬组织(肌肉)以及培养细胞的细胞核的制备。

a. 组织匀浆：称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL预冷的Lysis Buffer，再加入50μL Reagent A，0℃冰浴中上下研磨组织20次;有未研磨开的组织，可用双层纱布过滤。

b. 培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800 g 离心5~10 min收集细胞，计数。每次提取需要5 ×107个细胞，加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞，再加入50μL Reagent A，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨细胞20~30次。
2. 将组织或细胞匀浆物转移到1.5mL离心管中，4℃，700g 离心5 min。细胞核沉淀在收集管底部，弃上清。加入0.5 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬沉淀。
3. 取另一新离心管内加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重悬液，沿管壁小心地加入到此离心管中，置于Medium Buffer之上，4℃，700 g 离心5min。细胞核沉淀在管底。
4. 弃上清，在细胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重悬细胞核沉淀，1000g 离心10min ，弃上清，得到较纯的细胞核沉淀。
5. 用50-100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬细胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。