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技术文献

应如何快速消除ELISA干扰?

文字:[大][中][小] 2025-8-12    浏览次数:37    
     有稀释标本、改变酶标抗体、标本中RF用变性IgG预先封闭、测定抗原时加入还原剂、包被或酶标二抗使用特异的鸡抗体IgY、对临床血清标本加热灭活补体、使用特异的兔F(ab’)2片段作为固相或测定酶标抗体、在标本或标本稀释液中加入过量的动物Ig、使用靶特异的非Ig亲和蛋白替代固相或酶标抗体之一等方法。
稀释标本
     在测定前对标本进行稀释,特异的IgM因高滴度存在仍可检出,而非特异的RF则会因为稀释变成非常低的滴度,从而 对测定几乎不产生干扰。

改变酶标抗体
    将待酶标的抗体的F片段酶切夫除,仅留下具有特异结合功能的F(ab’)2部分标记酶,则在测定中即可避免RF的干扰。

标本中RF用变性IgG预先封闭
   将经热变性(63℃,10min)的动物如兔、羊等的IgG加入到标本稀释液中,或是将该变性IgG连接至一颗粒固相如聚苯乙烯微球或微孔,然后加入临床血清标本,反应后,再吸出标本进行检测2。

测定抗原时加入还原剂
    在标本中加入可使RF降解的还原剂,如2—巯基乙醇。2—巯基乙醇等还原剂可使抗体内的巯基裂解,因而可以去除RF的干扰,但只适用于抗原测定。

包被或酶标二抗使用特异的鸡抗体IgY
    RF不与鸡IgY反应,如果包被和酶标二抗均为鸡IgY抗体,则不受标本中RF的干扰2。

对临床血清标本加热灭活补体
   采用56℃30min加热可使标本中的补体C1灭活。

使用特异的兔F(ab’)2片段作为固相或测定酶标抗体
    异嗜性抗体可通过交联固相和酶标的单抗或多抗而出现假阳性反应。使用特异的兔F(ab’)2片段作为固相或测定酶标抗体可以避免这种干扰。

在标本或标本稀释液中加入过量的动物Ig
封闭可能存在的异嗜性抗体,从而避免其干扰。

使用靶特异的非Ig亲和蛋白替代固相或酶标抗体之一
这种方法可以避免异嗜性抗体的干扰。

以上方法可以帮助快速消除ELISA干扰。在实际操作中,可以根据具体情况选择合适的方法或组合使用多种方法。
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